Companhia Ambiental do Estado de São Paulo


 Testes para fermentação da lactose e liquefação da gelatina. 8.1.3.1



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8.1.3  Testes para fermentação da lactose e liquefação da gelatina.

8.1.3.1  Para a execução destes testes são necessários os seguintes meios e soluções:

a)  Meio lactose-gelatina

Fórmula:

Triptose..........................................................................................................................................15,0g

Extrato de levedura........................................................................................................................10,0g

Lactose...........................................................................................................................................10,0g

Monohidrogeno fosfato de sódio (Na

2

HPO



4

)..................................................................................5,0g

Vermelho de fenol .........................................................................................................................0,05g

Gelatina .......................................................................................................................................120,0g

Água destilada ......................................................................................................................... 1 000mL

pH final:.............................................................................................................................................7,5



Preparo:

Dissolver os componentes, exceto a gelatina e o vermelho de fenol, em 1000mL de água destilada

fria. Ajustar o pH para 7,5. Adicionar a gelatina e o vermelho de fenol e aquecer, agitando

freqüentemente, até a completa dissolução do meio, tomando cuidado para que não seja atingida a

temperatura de ebulição. Distribuir 13mL em tubos de tampa de rosca. Autoclavar a 121ºC durante

15 minutos. Os tubos podem ser armazenados sob refrigeração durante 1 mês.




CETESB /L5.403 / junho/2004

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8.1.3.2 Procedimento para realização dos testes:

a)  Com o auxílio de uma pipeta Pasteur estéril ou uma alça de inoculação devidamente flambada e

resfriada, inocular no meio lactose-gelatina uma porção das culturas puras do caldo tioglicolato.

Incubar a 35ºC durante 18-24 horas.

b)  Após o período de incubação, efetuar a leitura, considerando:

b.1) Teste de fermentação da lactose: considerar como resultado positivo a acidificação do meio,

evidenciada pela viragem do indicador de pH, (vermelho de fenol) para amarelo;

b.2) Teste de liquefação da gelatina: colocar os tubos durante 1 hora em geladeira e efetuar a leitura.

Considerar como culturas positivas aquelas em que o meio não volta a se solidificar após esse

período (hidrólise positiva).

8.2 As culturas de Clostridium perfringens devem apresentar, nessas provas bioquímicas, os

resultados apresentados no quadro abaixo:

Catalase

-

Motilidade



-

Redução do nitrato

+

Fermentação da lactose



+

Liquefação da gelatina

+



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