Companhia Ambiental do Estado de São Paulo


 Testes para motilidade e redução do nitrato 8.1.2.1



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8.1.2 Testes para motilidade e redução do nitrato

8.1.2.1  Para a execução destes testes são necessários os seguintes meios e soluções:

a)  Meio nitrato-motilidade



Fórmula:

Extrato de carne...............................................................................................................................3,0g

Peptona ............................................................................................................................................5,0g

Nitrato de potássio (KNO

3

 ) ............................................................................................................1,0g



Ágar .................................................................................................................................................1,0g

Água destilada ......................................................................................................................... 1 000mL

pH final :...................................................................................................................................7,0 

±

 0,2



Preparo:

Pesar os componentes e acrescentar 1000mL de água destilada fria. Deixar em repouso por

aproximadamente 15 minutos. Aquecer agitando freqüentemente, até a completa dissolução do

meio, tomando cuidado para que não seja atingida a temperatura de ebulição. Ajustar o pH para 7,0

±

 0,2.  Distribuir em tubos de tampa de rosca até 2/3 de sua capacidade. Autoclavar a 121ºC durante



15 minutos.

b)  Reagentes para o teste de redução do nitrato

1.  Solução A: Reativo de ácido sulfanílico

Fórmula:

Ácido sulfanílico .............................................................................................................................8,0g

Ácido acético 5N ..................................................................................................................... 1 000mL



CETESB /L5.403 / junho/2004

20

2.  Solução B: Reativo de naftilamina



Fórmula:

Alfa-naftilamina ..............................................................................................................................5,0g

Ácido acético 5N ..................................................................................................................... 1 000mL

A obtenção do ácido acético 5N consiste na adição de 1 parte do ácido acético glacial para 2,5

partes de água destilada. Estocar os reagentes em frascos escuros.

8.1.2.2  Procedimento para realização dos testes:

a)  Com o auxílio de uma pipeta Pasteur estéril ou uma alça de inoculação devidamente flambada e

resfriada, inocular em profundidade no meio nitrato-motilidade uma porção do crescimento de cada

cultura pura do caldo tioglicolato. Incubar a 35ºC em anaerobiose durante 18-24 horas.

b)  Após o período de incubação, efetuar a leitura, considerando:

b.1) Teste de motilidade: considerar como resultado confirmativo para Clostridium perfringens

neste teste, o crescimento bacteriano restrito à linha de inoculação da cultura em teste (motilidade

negativa).

b.2) Teste de redução do nitrato: adicionar 0,5mL das soluções A e B ao meio e, após 1 a 2 minutos,

efetuar a leitura. Considerar como teste positivo o desenvolvimento de uma coloração vermelha no

meio de cultura.



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