Companhia Ambiental do Estado de São Paulo


  Procedimento de confirmação



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6.3.8  Procedimento de confirmação

Devido à seletividade do meio Ágar mCP, uma contagem presuntiva é normalmente utilizada para

análises de rotina, entretanto, se desejado, efetuar o procedimento de confirmação das colônias,

conforme descrito a seguir:



6.3.8.1 Selecionar um número de 10 colônias típicas bem isoladas, para serem submetidas ao

procedimento de confirmação;



6.3.8.2  Identificar tubos de caldo tioglicolato, de tal modo que cada colônia corresponda a um tubo

e, com o auxílio de uma agulha de inoculação, devidamente flambada e resfriada, transferir um

inóculo de cada colônia para o tubo correspondente e incubar a 35 

±

 0,5ºC durante 24 horas;



6.3.8.3 Avaliar a pureza da cultura de Clostridium perfringens no caldo tioglicolato, através da

coloração de Gram (pequenos bacilos gram-positivos);



6.3.8.4 Inocular 1mL de todos os tubos que apresentarem crescimento no caldo tioglicolato em

tubos contendo o meio de leite com ferro, devidamente identificados, e incubar a 44,5 

±

 0,2 ºC


durante 2 horas;


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6.3.8.5 Efetuar a leitura, considerando positivos todos os tubos que apresentarem fermentação

turbulenta do leite com rápida formação de coágulos; e

6.3.8.6 Considerar como resultado confirmativo para Clostridium perfringens as colônias que

apresentarem as seguintes características: bacilos gram-positivos e produção de fermentação

turbulenta do leite.

Observações:

 

 O esquema de procedimento até o teste confirmativo é apresentado na figura 2.



 

 O procedimento para realização de testes bioquímicos complementares está descrito no item 08




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