Companhia Ambiental do Estado de São Paulo


 Filtração da amostra e incubação



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6.3.6  Filtração da amostra e incubação:

6.3.6.1 Verter cuidadosamente o volume da amostra a ser examinado no porta filtro, evitando que a

água respingue sobre as bordas superiores do mesmo.



6.3.6.2 Ligar o sistema ou a bomba de vácuo e proceder a filtração.

6.3.6.3  Após a filtração, enxaguar o porta-filtro duas vezes com porções de 20-30mL de água de

diluição tamponada estéril, para evitar a retenção de bactérias nas paredes internas do mesmo.



6.3.6.4  Desligar a fonte de vácuo, ao finalizar a operação. Evitar a secagem excessiva da membrana

filtrante.



6.3.6.5 Separar a parte superior do porta-filtro e, com uma pinça, cujas extremidades foram

flambadas e resfriadas, retirar com cuidado a membrana. Acoplar novamente a parte superior do

porta-filtro à inferior.

6.3.6.6 Obedecendo aos cuidados de assepsia, colocar cuidadosamente a membrana com a

superfície quadriculada voltada para cima, na superfície  do meio de cultura contido na placa de

Petri, devidamente identificada com o número da amostra e o volume filtrado.

Observação: Ao transferir a membrana para a superfície do meio de cultura, observar que toda a área da membrana deve

ficar completamente aderida ao meio. Para isso, segurando a membrana pelas bordas (fora da área de filtração) com as

extremidades da pinça, previamente flambadas e resfriadas, colocá-la sobre o meio de cultura e efetuar um movimento

giratório da mesma, para permitir uma boa adesão. Se persistir a formação de bolhas entre a membrana e o meio de

cultura, sempre com a extremidade da pinça, levantar a borda da membrana mais próxima à bolha para eliminá-la, pois

as bolhas impedem o contato das bactérias com o meio de cultura, dificultando, ou mesmo impedindo, seu crescimento.



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