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c) Biblioteca dos Espectros
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| c) Biblioteca dos Espectros
Analisar um volume apropriado de cada amostra (5-50 µL), até que a absorção do pico máximo esteja entre 0,1 e 0,8 AU (Unidade de Absorbância) de solução individual padrão de cada filtro solar. Criar uma biblioteca dos espectros com tempo de retenção e espectro do composto. d) Preparo da Amostra Pesar 2 g da amostra em um frasco âmbar de 60 ml com tampa de rosca. Adicionar 40 ml de metanol e 0,25 ml de ácido sulfúrico 2M. Tampar o frasco e aquecer a 60ºC por aproximadamente cinco minutos, até a solução ficar homogênea. Obs.: Caso a solução não esteja homogênea, resfriá-la à temperatura ambiente, trans- feri-la quantitativamente para um balão volumétrico de 50 ml e lavar o balão com duas alíquotas de 4 ml de metanol. Completar o volume com metanol e, se necessário, centrifugar a suspensão. Diluir 1 ml desta solução com 5 ml do solvente. Armazenar a amostra diluída em um vial (recipiente específico utilizado para cromatografia) e analisá-la em até 24 horas. e) Condições Cromatográficas Cromatógrafo em fase líquida de alta eficiência (CLAE) com detector ultravioleta. Coluna: PLRP-S, 100 µ, comprimento 15 cm, diâmetro interno 4,6 mm, tamanho da partícula 5 µm ou equivalente. Temperatura da coluna: 25ºC. Volume de injeção: 2 a 30 µl. Fluxo: ver tabela abaixo. Fase móvel: acetonitrila (solvente A) - tetraidrofurano (solvente B) - tampão (solvente C) com o seguinte gradiente de concentração: T (min) Fluxo (ml/min) % A % B % C 0 0,8 10 10 80 2,5 0,8 10 10 80 25 0,6 45 45 10 35 0,6 45 45 10 40 0,8 10 10 80 45 0,8 10 10 80 Comprimento de onda do detector: 240-400 nm, de acordo com o filtro a ser analisado. |